Číslo publikace RU2109289C1 RU2109289C1 RU95119084A RU95119084A RU2109289C1 RU 2109289 C1 RU2109289 C1 RU 2109289C1 95119084C95119084 A95119084 RU95119084 A95119084 RU95119084 A2109289 RU1 2109289 A RU1 A RU 2109289A RU 1 C1995 RU11 C08 RU 95119084C95119084 Autorita RU Rusko Klíčová slova dosavadního stavu techniky kandidóza candida albicans kandidóza hiv rnga 1995-11 Datum přihlášky 08 RU1995A Jiné jazyky Angličtina ( en ) Jiné verze RU11A ( ru Vynálezce Oksana Khatikovna Gyaurgieva Tatyana Nikolaevna Lebedeva Aza Gasanovna Rakhmanova Svetlana Mikhailovna Ignatyeva Původní pověřenec Oksana Khatikovna Nikolakh Le Mikhayevna Nikolakh ilovna Ignatyeva Datum priority (Datum priority je předpoklad a není právním závěrem. Google neprovedl právní analýzu a neposkytuje žádné prohlášení ohledně přesnosti uvedeného data.) 08-1998-04 Datum podání 20-1995-11 Datum zveřejnění 08 1995-11-08 Žádost o vydání 95119084-2109289-1 1997-10-20 Aza Gasanovna Rakhmanova, Svetlana Mikhailovna Ignatyeva podala kritickou Oksana Khatikovna Gyaurgieva 95119084-95119084-1998 Priorita na RU04A priorita Critical patent/RU20C1998/ru 04-20-2109289 Publikace 1-2109289-1 Publikace XNUMX RUXNUMX/XNUMX XNUMX-XNUMX-XNUMX Schválena žádost Kritický XNUMX-XNUMX-XNUMX Zveřejnění publikace RUXNUMXCXNUMX Kritický patent/RUXNUMXCXNUMX/ru
snímky
Krajiny
- Měření nebo testování zahrnující enzymy nebo mikroorganismy (OBLAST)
- Zkoumání nebo analýza biologických materiálů (OBLAST)
Abstraktní
Metoda diagnostiky kandidózy u HIV infekce je založena na zohlednění výsledků dvou sérologických testů – RNGA a ELISA – současně. Pokud jsou titry protilátek proti Candida albicans v krevním séru detekovány nad diagnostické hodnoty pouze u RNGA, je diagnostikována povrchová kandidóza, a pokud jsou titry protilátek proti Candida albicans v krevním séru detekovány nad diagnostické hodnoty současně ve dvou reakcích – u RNGA a ELISA (> 1:400), je diagnostikována hluboká kandidóza. Účinnost navržené diagnostické metody je 76,36 a 80 % pro každou klinickou formu. 1 stůl.
Popis
Vynález se týká lékařství a může být použit v klinické mykologii.
Je známá metoda diagnostiky kandidózy stanovením titrů protilátek v krevním séru proti Candida albicans v nepřímé hemaglutinační reakci (IHA) a v enzymatickém imunosorbentním testu (ELISA) u pacientů infikovaných HIV [1,2,3]. Nevýhodou těchto metod je nízká spolehlivost těchto testů v sérologické diagnostice kandidózy, nízká specificita RNGA (40 %) a nízká senzitivita ELISA (33 %). Dále je popsáno použití těchto testů pro diagnostiku kandidózy, nikoli však jejích klinických forem.
Účelem vynálezu je vytvořit diagnostický nástroj pro klinickou formu kandidózy.
Tohoto cíle je dosaženo vyšetřením titrů protilátek proti Candida albicans v krevním séru současně ve dvou reakcích – RNG a ELISA – a při detekci titrů protilátek nad diagnostické hodnoty pouze v RNGA (hodnota titru > – log2 6) je diagnostikována povrchová kandidóza, a pokud jsou titry protilátek detekovány vyšší než diagnostické titry v RNGA a ELISA (hodnota titru > 1:400), je diagnostikována hluboká kandidóza.
Způsob se provádí následovně.
Nepřímá hemaglutinační reakce byla provedena za použití Takachi mikrotitru v objemu 0,1 ml. Jako diagnostický prostředek byly použity formalizované ovčí erytrocyty (FRE) senzibilizované celkovým glykoproteinovým antigenem buněčné stěny Candida albicans (4). Ředidlo v reakci byl fyziologický roztok pufrovaný fosfátem (PBS) s pH 7,2. Reakce byla nastavena následovně. V jamkách destiček byla připravena dvojnásobná ředění studovaného krevního séra v PBS od 1:2 do 1:32768 (tj. z log.21 až — log2 15), poté bylo do každé jamky přidáno stejné množství erytrocytárního diagnostica. Paralelně s experimentem byly za použití stejných objemů kapalin připraveny 3 kontrolní vzorky pro posouzení specifičnosti reakce:
1) ředidlo + diagnostika,
2) ředidlo + FEB
3) minimální separace testovacího séra + FEB.
Destičky byly zakryty a inkubovány při 37 °C po dobu dvou hodin, poté byly zaznamenány výsledky reakce. Pokud byly výsledky negativní, erytrocyty se usadily na dně jamky ve formě krajkového filmu s vroubkovanými okraji. Výsledky reakce byly vyhodnoceny v binárních logaritmech.
Stanovení protilátek proti Candida albicans bylo provedeno v nepřímé verzi ELISA za použití standardních testovacích systémů ELISA. Pro nastavení analýzy bylo přidáno 0,1 ml dvojnásobného ředění, počínaje diagnostickým, testovaného séra v 0,01 M fyziologickém roztoku pufrovaném fosfátem 0,05% Tween-20 (PBS-T) do jamek polystyrenové destičky s imobilizovanou protilátkou Candida albicans, po trojnásobném promytí s P1BS-37 T. Ke každému z nich bylo přidáno 0,1 ml konjugátu (protein A – křenová peroxidáza) v koncentraci 200 ng/ml. Destička byla inkubována po dobu 1 hodiny při 37 °C a poté byly všechny jamky destičky 5krát promyty PBS-T. Po promytí bylo do všech jamek přidáno 0,1 ml roztoku substrátu (0,05% o-fenylendiamindihydrochlorid s 0,06% peroxidem vodíku v 0,1 M fosfát-citrátovém pufru, pH 5,0). Pro rozvinutí enzymatické reakce byla destička umístěna na tmavé místo na 20 minut, poté bylo do každé jamky přidáno 0,1 ml 1M roztoku kyseliny sírové. Jako pozitivní a negativní kontrola v ELISA byl použit γ-globulin od zdravého člověka v koncentraci 1:1000 a hyperimunní králičí sérum proti Candida albicans v koncentraci 1:1600. Diagnostické ředění séra pacientů bylo 1:400. Výsledky ELISA byly zaznamenány pomocí fotometru KAI-Ts-01 při vlnové délce 490 nm. Reakce byla hodnocena, pokud optická hustota negativní kontroly nepřesáhla 0,2 a pozitivní kontroly přesáhla 0,5. Při stanovení titru specifických protilátek bylo zaznamenáno poslední ředění testovaného séra, které poskytlo hodnotu optické hustoty alespoň 0,2.
Byla provedena studie na 78 pacientech infikovaných HIV. Na základě výsledků komplexního vyšetření bylo u 36 z nich diagnostikována povrchová kandidóza, u 18 hluboká kandidóza a 24 bez kandidózy. U 32 z 36 pacientů s povrchovou kandidózou byly zvýšené titry protilátek proti Cadida albicans zaznamenány pouze u RNGA. U hluboké kandidózy vykazovalo 10 z 18 pozitivní reakce v RNGA i ELISA (tabulka).
Příklad 1. Pacient G., 24 let, homosexuál. Byl zjištěn dva roky před přijetím při vyšetření po kontaktu se sexuálním partnerem infikovaným HIV. Stěžoval si na rychlou únavu, pocení a ztrátu hmotnosti o více než 10 %. Při vyšetření byla odhalena řada patologických změn: zvětšené periferní lymfatické uzliny, hepatomegalie, bílý povlak na jazyku, hyperémie krčních mandlí. V kulturách hlenu z hltanu a ve seškrabech z jazyka dochází k růstu Candida albicans. Výtěry z krku také ukázaly růst Staphyloccus aureus. Titr protilátek proti Candida albicans v krevním séru v RNGA byl roven — log25, v IFA – 1:200. Obě hodnoty byly v normálních mezích, což naznačuje nepřítomnost kandidózy.
Na pozadí antibakteriální terapie ustoupil zánět krčních mandlí, což naznačovalo nepřítomnost kandidózy a potvrzenou bakteriální tonzilitidu.
Příklad 2. Pacient P., 38 let. Infikován HIV prostřednictvím heterosexuálního kontaktu, pravděpodobně před dvěma lety. Během dvou let pozorování se u pacienta poprvé objevily útvary na obou plochách jazyka. Stěžoval si na pálení a bolest v postižené oblasti. Útvary měly nepravidelný tvar, nerovnoměrné obrysy, bělavě perleťovou barvu, hutnou konzistenci, byly srostlé se sliznicí. Makroskopický obraz připomínal chlupatou leukoplakii. Titr sérových protilátek proti Candida albicans v RNGA — log29, v IFA – 1:100, tzn. V RNGA byl zjištěn titr vyšší než diagnostický, což odpovídalo povrchové kandidóze. Při prohlídce materiálu z postižené oblasti bylo zjištěno mycelium plísně, zjištěn růst Candida albicans a objeveny cytologické známky glositidy. Následně byl efektem antimykotické terapie kandidózní charakter glositidy, která se vyskytovala ve formě vlasaté leukoplakie (hyperplastická varianta kandidózy).
Příklad 3. Pacient K., 35 let, byl infikován prostřednictvím homosexuálních kontaktů. Načasování infekce není známo. Přiznáno silné bolesti hlavy, slabost, horečka do 39 o C. Stav střední. Vědomí je jasné. Nebyly zjištěny žádné známky poškození centrálního nervového systému, včetně meningeálních příznaků. Sliznice dutiny ústní je hyperemická a volná; Na sliznici tváře je bílý povlak a izolované enantémy. Kultury orálního hlenu vykazovaly růst Candida albicans, Candida tropicalis a Staphylococcus aureus. V tomto případě byly titry protilátek proti Candida albicas v krevním séru v RNGA rovné — log27 a v ELISA – 1: 1600, což indikovalo systémovou mykózu. Pro diagnostické účely byla provedena lumbální punkce. V mozkomíšním moku byl zjištěn růst Candida albicans. Pacient měl tedy kromě kandidálně-bakteriální stomatitidy meningitidu způsobenou Candida albricans.
Navržená metoda zajišťuje kvalitní diagnostiku klinické formy kandidózy. Pro diagnostiku povrchové kandidózy je senzitivita metody 94,12 %, specificita 47,62 % a účinnost 76,36 %. Diagnostika hluboké kandidózy se provádí se senzitivitou 83,33 %, specificitou 76,92 % a účinností 80 %.
Navržený způsob diagnostiky kandidózy má tedy vysokou spolehlivost při řešení složitého diagnostického problému rozlišení povrchové a hluboké kandidózy u pacientů infikovaných HIV.
1. Gyaurgieva O.Kh., Babenko G.A., Ignatyeva S.M., Lebedeva T.N. — Účinnost sérologické diagnostiky kandidózy u pacientů infikovaných HIV. — „Aktuální otázky vědecké a praktické dermatologie a venerologie“ (Republikánský mezirezortní sborník), číslo 5, Dněpropetrovsk, 1994, s. 400.
2. Gyaurgieva O.Kh., Lebedeva T.N., Ilyina V.Ya. — Titry protilátek proti Candida albicans u pacientů infikovaných HIV – Sborník příspěvků z mezinárodního sympozia „Pasteurovy myšlenky v boji proti infekcím“, St. Petersburg, 1995, s. 108.
3. Gyaurgieva O. Kh., Lebedeva T. N., Ilyina V. Ya. — Srovnávací hodnocení sérologických testů v diagnostice kandidózy u infekce HIV. Sborník příspěvků z mezinárodní mykologické konference “Patogeneze, diagnostika a terapie mykóz a mykogenních alergií”, Petrohrad, 1995,
4. Lebedeva T. N. – Antigenní diagnosticum pro stanovení protilátek u pacientů s kandidózou. — Laboratorní práce, 1980, N 12, s. 620-621.
Nároky (1)
1. Metoda diagnostiky kandidózy u infekce HIV studiem titru protilátek proti Candida albicans v krevním séru, vyznačující se tím, že studium titrů protilátek se provádí současně ve dvou reakcích – nepřímé hemaglutinační reakci (IHA) a v enzymatické imunosorbentní analýze (ELISA) – a v případě pozitivní IHA je diagnostikována hluboká kandidóza, je diagnostikována povrchově pozitivní, candidia d.
RU95119084A 1995-11-08 1995-11-08 Metoda diagnostiky kandidózy u HIV infekce RU2109289C1 (ru)
Prioritní aplikace (1)
| Číslo žádosti | Důležité datum | Datum podání | Titul |
|---|---|---|---|
| RU95119084A RU2109289C1 (ru) | 1995-11-08 | 1995-11-08 | Metoda diagnostiky kandidózy u HIV infekce |
Aplikace nárokující si prioritu (1)
| Číslo žádosti | Důležité datum | Datum podání | Titul |
|---|---|---|---|
| RU95119084A RU2109289C1 (ru) | 1995-11-08 | 1995-11-08 | Metoda diagnostiky kandidózy u HIV infekce |